Cromatografía líquida

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Cromatografía líquida

Cromatografía líquida

La Cromatograf√≠a l√≠quida, tambi√©n conocida como Cromatograf√≠a de l√≠quidos, es una t√©cnica de separaci√≥n y no debe confundirse con una t√©cnica cuantitativa o cualitativa de an√°lisis. Es una de las t√©cnicas anal√≠ticas ampliamente utilizada, la cual permite separar f√≠sicamente los distintos componentes de una soluci√≥n por la absorci√≥n selectiva de los constituyentes de una mezcla. En toda cromatograf√≠a existe un contacto entre dos fases, una fija que suele llamarse fase estacionaria, y una m√≥vil (fase m√≥vil) que fluye permanente durante el an√°lisis, y que en este caso es un l√≠quido o mezcla de varios l√≠quidos. La fase estacionaria por su parte puede ser al√ļmina, s√≠lice o resinas de intercambio i√≥nico que se encuentran disponibles en el mercado. Los intercambiadores i√≥nicos son matrices s√≥lidas que contienen sitios activos (tambi√©n llamados grupos ionog√©nicos) con carga electrost√°tica (positiva o negativa). De esta forma, la muestra queda retenida sobre el soporte s√≥lido por afinidad electrost√°tica. Dependiendo de la relaci√≥n carga/tama√Īo unos constituyentes de la mezcla ser√°n retenidos con mayor fuerza sobre el soporte s√≥lido que otros, lo que provocar√° su separaci√≥n. Las sustancias que permanecen m√°s tiempo libres en la fase m√≥vil, avanzan m√°s r√°pidamente con el fluir de la misma y las que quedan m√°s unidas a la fase estacionaria o retenidas avanzan menos y por tanto tardar√°n m√°s en salir o fluir. √Čste es el principio fundamental de la cromatograf√≠a. Un ejemplo notable es la cromatograf√≠a de intercambio i√≥nico. Las columnas m√°s utilizadas son las de s√≠lice.

Métodos de cromatografía líquida

Método Abreviatura Mecanismo predominante
Líquido, sólido o de adsorción LSC Adsorción sobre la superficie
Líquido LLC Reparto entre fases líquidas, una móvil y la otra estacionaria.
Fase enlazada BPC Reparto y / o adsorción entre las fases móvil y enlazada.
Pares de iones IPC Separación de pares de iones entre las fases móvil y enlazada.
Intercambio iónico IEC Uso de la carga por adsorción sobre un sitio iónico fijo por medio de intercambio de cationes o de aniones.
Exclusi√≥n est√©rica EC Aprovechamiento del tama√Īo de las mol√©culas por su difusi√≥n dentro de poros de tama√Īo adecuado.
Afinidad -- Uso de la estructura de ligantes inmovilizados para unir bioselectivamente la proteína deseada.

Selección de un método de cromatografía líquida

El conocimiento de la estructura molecular de los componentes de la muestra puede ser muy √ļtil en la selecci√≥n de un m√©todo de cromatograf√≠a l√≠quida. Una gu√≠a muy general para la selecci√≥n de un m√©todo se da a continuaci√≥n.

La cromatograf√≠a de adsorci√≥n opera mejor en la separaci√≥n por clases de compuestos o para la separaci√≥n de compuestos isom√©ricos. La t√©cnica de cromatograf√≠a l√≠quido ‚Äď l√≠quido es mejor para la separaci√≥n de hom√≥logos. Los grupos funcionales que son capaces de formar enlaces de hidr√≥geno fuertes se retienen mucho en cromatograf√≠a de adsorci√≥n, sin embargo la CLL(L√≠quido ‚Äď l√≠quido) proporciona una alternativa para la separaci√≥n de estos compuestos, estas ser√°n las muestras que tienen polaridad media y son solubles en disoluciones org√°nicas d√©bilmente polares, en general en CLL se logra emparejando la polaridad de la fase estacionaria con la de la muestra y utilizando una fase m√≥vil con una polaridad marcadamente diferente.

La más utilizada es la de fase enlazada, BPC, Reparto y/o adsorción entre las fases móvil y enlazada, y en especial la fase reversa (especialmente la C18) pues permite separar tanto compuestos con cierta apolaridad como compuestos iónicos mediante el uso de la técnica de supresión de la ionización o de la cromatografía de par iónico dependiendo del pH de máxima estabilidad de la columna.

Los grupos iónicos y los ionizables sugieren el uso de la cromatografía de intercambio iónico o de pares de iones cuando la muestra es soluble en agua y los pesos moleculares son menores de 2000 daltons.

Cuando se sabe o se sospecha que el peso molecular excede de 2000 daltons para alguno o todos los componentes de la muestra, entonces es indicado el uso de cromatograf√≠a de exclusi√≥n (permeaci√≥n en gel). Este m√©todo se basa en la actitud de los sustratos de porosidad controlada para clasificar y separar muestras de mezclas de acuerdo al tama√Īo y forma molecular.

Un procedimiento cromatogr√°fico adicional depende de la estructura de los solutos considerada como un todo y no como funci√≥n de grupos funcionales espec√≠ficos o de la carga y el tama√Īo. La cromatograf√≠a de afinidad utiliza especies bioqu√≠micas inmovilizadas como fase estacionaria para separar uno o algunos solutos de entre cientos de ellos que no se retienen. Las separaciones explotan el enlace de cerradura y llave que prevalecen en los sistemas biol√≥gicos.

Véase también

Obtenido de "Cromatograf%C3%ADa l%C3%ADquida"

Wikimedia foundation. 2010.

Mira otros diccionarios:

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  • Prote√≥mica ‚ÄĒ Preparaci√≥n rob√≥tica de muestras para espectrometr√≠a de masas MALDI TOF Prote√≥mica es estudio a gran escala de las prote√≠nas, en particular de su estructura y funci√≥n.[1] ‚Ķ   Wikipedia Espa√Īol


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